Molekularni Biolog Prvi Put Radio Colony PCR — Rezultat: Prazan Gel i Bezbroj Pitanja

Kada protokoli ne odgovaraju na najosnovnije pitanje — koliko kolonije u reakciju — laboratorij postaje ratno polje dva sklada: baciti ili razriješiti?
Croatian

Molekularni Biolog Prvi Put Radio Colony PCR — Rezultat: Prazan Gel i Bezbroj Pitanja · Avonetics

🎧 Podcast episode
Coming soon — Ivan & Ema are taking this one into the studio.
Sponsored—As an Amazon Associate, Avonetics earns from qualifying purchases. Sony WH-1000XM5 headphones Whether you work in a noisy office or travel often, Sony WH-1000XM5 headphones deliver outstanding noise cancellation and exceptional comfort. They are ideal for anyone who wants to stay focused or enjoy rich, detailed audio anywhere. Check out the link in the episode description. Learn more →

Sjedim pred termociklerom, prsti još uvijek mirišu na etanol i LB medij. Moj prvi put kolonijski PCR — i ni jedan bend na gelu. Protokoli govore o mikrographama template DNA, 100 ng, ali nitko ne kaže koliko mikrolira razrijeđene kolonije u ddH2O stvarno pripada u reakciju. Master mix traži samo primer-e, vodu i template. Ja sam radio najjednostavnije: jedna kolonija, jedan mikrolitar ultraciste vode, master mix izravno na to. Ništa. Nula. Samo pužan wells na agarozi.

Pitam se: jesam li ja bez transformanata ili je moja dilucija kriva? Trebam li koloniju razvući u 4 mikrolitra pa onda uzeti samo jedan? Ili je problem u tome što master mix ne lizi stanice dovoljno brzo? Noćas sam pročitao dvadeset protokola, svaki drugačiji. Ne znam više kome vjerovati.

Read nextKad tišina govori glasnije: priče o anksioznosti i gubitku pamćenja koje su pogodile srce

Zajednica se podijelila na dva sklada. Jedna strana vjeruje u brzinu: uzmi koloniju, baci u reakciju, postavi 10 minuta na 95°C, gotovo. "Godinama radim tako, nikad problema," kaže jedan iskusni kolega. Drugi dodaje da istu tipku ostavlja u LB mediju za overnight kulturu — dvostruka dobit, nula gubitka vremena.

Suprotna stranka insistera na disciplini: razrijedi koloniju u 20 do 100 mikrolitara vode, zagrij na 95 do 100°C pet do deset minuta, centrifugiraj, uzmi supernatans. "Zaboravi na ng," upozorava jedan veteranj, "to ne važi za nečistu prepravku, a celulani ostaci inhibiraju PCR." Drugi precizira: previše materijala u reakciji znači inhibicija, a bez proper lysis nema template za amplifikaciju.

Sponsored—As an Amazon Associate, Avonetics earns from qualifying purchases. Waykar 150 Pint Energy Star Dehumidifier 【Waykar 150 Pints for Spaces up to 7,000 Sq. Ft】Effectively extracts up to 150 pints of humidity per day (under 95°F, 90% RH), making it ideal for damp basements, humid homes, bedr… See it →

Za novca u laboratoriju, izbjegavanje grešaka znači odabrati stranu. Ali možda je rješenje negdje posredno: počni oprezno da vidiš da li imaš insert, pa ubrzaj kad si siguran.

Voditelji Pod Mikroskopom raspravljaju o ovom laboratorijskom dilemmi u najnovijoj epizodi — slušajte kako dolaze do verdikta.

Sponsored—As an Amazon Associate, Avonetics earns from qualifying purchases. Claiks Electric Standing Desk Ergonomic Home Office Desk: Claiks' standing desk is the result of years of constant iteration, providing a trustworthy home office rising experience and high-quality products that… See it →
0:00
0:00
Link copied ✓
↑